ווירוס נוקלעיק זויער דעטעקשאַן

די גענאָמיק סיקוואַנסיז פון רובֿ ווירוסעס זענען באקאנט.נוקלעיק זויער פּראָבעס וואָס זענען קורץ סעגמאַנץ פון דנאַ דיזיינד צו כייברידיז מיט קאַמפּלאַמענטשי וויראַל דנאַ אָדער רנאַ סעגמאַנץ.די פּאָלימעראַסע קייט רעאַקציע (PCR) איז אַ מער עפעקטיוו טעכניק פֿאַר וויראַל דיטעקשאַן.הויך טרופּוט דיאַגנאָסטיק מעטהאָדס זענען לעצטנס דעוועלאָפּעד.

יי נוקלעיק זויער כייברידיזאַטיאָן טעכניק

נוקלעיק זויער כייברידיזיישאַן, דער הויפּט אַרייַנגערעכנט סאָוטהערן בלאָטינג (סאָוטהערן) און נאָרדערן בלאָטינג (צאָפנדיק), איז אַ שנעל דעוועלאָפּינג נייַע טעכניק אין די ווירוס דיאַגנאָסטיק פעלד.דער סייכל פון די כייברידיזיישאַן אַסייַ איז צו נוצן קורץ סעגמאַנץ פון דנאַ (גערופן "זאָנד") דיזיינד צו כייברידיזירן מיט קאַמפּלאַמענטשי וויראַל דנאַ אָדער רנאַ סעגמאַנץ.דורך באַהיצונג אָדער אַלקאַליין באַהאַנדלונג, טאָפּל-סטראַנדיד ציל דנאַ אָדער רנאַ זענען אפגעשיידט אין איין סטראַנדז און דעמאָלט ימאָובאַלייזד אויף אַ האַרט שטיצן.נאָך דעם, זאָנד איז מוסיף און כייברידייזד מיט די ציל דנאַ אָדער רנאַ.ווי די זאָנד איז לייבאַלד מיט יסאָטאָפּע אָדער ניט-ראַדיאָאַקטיוו נוקלייד, די ציל דנאַ אָדער רנאַ קענען זיין דיטעקטאַד דורך אַוטאָראַדיאָגראַפי אָדער דורך די ביאָטין-אַווידין סיסטעם.זינט רובֿ וויראַל גענאָמעס האָבן שוין קלאָונד און סיקוואַנס, זיי קענען זיין דיטעקטאַד מיט ווירוס-ספּעציפיש סיקוואַנסיז ווי פּראָבעס אין די ספּעסאַמאַן.דערווייַל, די כייברידיזיישאַן מעטהאָדס כולל: פּונקט בלאָטינג, אין סיטו כייברידיזיישאַן אין סעלז, דנאַ בלאָטינג (דנאַ) (סאָוטהערן בלאָט) און רנאַ בלאָטינג (רנאַ) (צאָפנדיק בלאָט).

B.PCR טעכנאָלאָגיע

אין די לעצטע יאָרן, אַ סעריע פון ​​​​ינוויטראָ נוקלעיק זויער אַמפּלאַפאַקיישאַן טעקניקס איז דעוועלאָפּעד באזירט אויף פּקר, צו פּרובירן ינסענסיטיוו אָדער אַנקאַלטיוואַבאַל ווירוסעס.פּקר איז אַ מעטאָד וואָס קענען סינטעז ספּעציפיש דנאַ סיקוואַנס דורך אַ וויטראָ פּאָלימעראַסע אָפּרוף.דער פּראָצעס פון פּקר כולל אַ טערמאַל ציקל פון דריי סטעפּס: דענאַטוראַטיאָן, אַנילינג, און פאַרלענגערונג אין הויך טעמפּעראַטור (93 ℃ ~ 95 ℃), די טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ איז אפגעשיידט אין צוויי איין דנאַ סטראַנדז;דערנאָך ביי נידעריק טעמפּעראַטור (37 ℃ ~ 60 ℃), צוויי סינטאַסייזד נוקלעאָטידע אָנפאַנגערס אַנאַלייז די קאַמפּלאַמענטשי דנאַ סעגמאַנץ;כוועראַז ביי די צונעמען טעמפּעראַטור פֿאַר טאַק ענזיים (72 ℃), סינטעז פון נייַ דנאַ קייטן אָנהייבן פֿון אָנפאַנגער 3'ענד ניצן קאַמפּלאַמענטשי דנאַ ווי טעמפּלאַטעס און איין נוקלעאָטידעס ווי מאַטעריאַלס.אַזוי נאָך יעדער ציקל, איין דנאַ קייט קענען זיין אַמפּלאַפייד אין צוויי קייטן.ריפּיטינג דעם פּראָצעס, יעדער דנאַ קייט סינטאַסייזד אין איין ציקל קענען זיין געוויינט ווי מוסטער אין דער ווייַטער ציקל, און די נומער פון דנאַ קייטן איז דאַבאַלד אין יעדער ציקל, וואָס מיטל די פּראָדוקציע פון ​​פּקר איז אַמפּלאַפייד אין אַ 2 ן קלאָץ גיכקייַט.נאָך 25-30 סייקאַלז, די פּראָדוקציע פון ​​פּקר איז יידענאַפייד דורך עלעקטראָפאָרעסיס, און די ספּעציפיש דנאַ פּראָדוקטן קענען זיין באמערקט אונטער ווו ליכט (254 נם).פֿאַר זייַן מייַלע פון ​​ספּעציפֿישקייט, סענסיטיוויטי און קאַנוויניאַנס, PCR איז אנגענומען אין קליניש דיאַגנאָסיס פון פילע וויראַל ינפעקשאַנז אַזאַ ווי HCV, HIV, CMV און HPV.ווי PCR איז זייער שפּירעוודיק, עס קענען דעטעקט ווירוס דנאַ אויף פג מדרגה, די אָפּעראַציע זאָל זיין דורכגעקאָכט זייער קערפאַלי צו ויסמיידן פאַלש positive.אין אַדישאַן, אַ positive רעזולטאַט אין נוקלעיק זויער פּרובירן טוט נישט מיינען אַז עס איז אַ לעבן ינפעקטיאָוס ווירוס אין דער מוסטער.

מיט אַ ברייט אַפּלאַקיישאַן פון פּקר טעכניק, נייַע טעקניקס און מעטהאָדס זענען דעוועלאָפּעד באזירט אויף פּקר טעכניק פֿאַר פאַרשידענע פּרובירן צילן.פֿאַר בייַשפּיל, די פאַקטיש צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר קענען דעטעקט וויראַל מאַסע;אין סיטו פּקר איז געניצט צו ידענטיפיצירן ווירוס ינפעקציע אין געוועב אָדער סעלז;די נעסטעד פּקר קענען פאַרגרעסערן די ספּעסיפיסיטי פון פּקר.צווישן זיי, פאַקטיש צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר איז דעוועלאָפּעד מער ראַפּאַדלי.פילע נייַע טעקניקס, אַזאַ ווי טאַקמאַן כיידראַלאַסאַס זאָנד, כייברידיזיישאַן זאָנד און מאָלעקולאַר ביקאַן זאָנד, זענען קאַמביינד אין פאַקטיש צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר טעכניק, וואָס איז וויידלי געניצט אין קליניש פאָרשונג.אין דערצו צו אַקיעראַטלי ידענטיפיצירן די וויראַל מאַסע אין די גוף פליסיק פון פּאַטיענץ, דעם אופֿן קענען אויך זיין געניצט צו דעטעקט מעדיצין-טאָלעראַנט מוטאַנט.דעריבער, פאַקטיש צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר איז דער הויפּט געווענדט אין קיוראַטיוו ווירקונג אפשאצונג און מעדיצין טאָלעראַנץ סערוויילאַנס.

C. הויך-טראַפּוט דיטעקשאַן פון וויראַל נוקלעיק אַסאַדז

צו טרעפן די באדערפענישן פֿאַר שנעל דיאַגנאָסיס פון נייַ ימערדזשאַנט ינפעקטיאָוס חולאתן, פאַרשידן הויך-טראַפּוט דיטעקשאַן מעטהאָדס, ווי דנאַ טשיפּס (דנאַ), זענען געגרינדעט.פֿאַר דנאַ טשיפּס, ספּעציפיש פּראָבעס זענען סינטאַסייזד און אַטאַטשט צו קליין סיליציום טשיפּס אין זייער הויך געדיכטקייַט צו פאָרעם דנאַ זאָנד מיקראָאַררייַ (דנאַ) וואָס קענען זיין כייברידייזד מיט מוסטער.דער סיגנאַל פון כייברידיזיישאַן קענען זיין ימאַדזשאַנד דורך קאַנפאָקאַל מיקראָסקאָפּ אָדער לאַזער סקאַנער און זיין פּראַסעסט ווייַטער דורך די קאָמפּיוטער און ריזיק דאַטן שטעלן וועגן פאַרשידענע גענעס קענען זיין באקומען.עס זענען צוויי טייפּס פון דנאַ שפּאָן.די "סינטעז שפּאָן" איז ווי גייט: די ספּעציפיש אָליגאָנוקלעאָטידעס זענען סינטאַסייזד גלייַך אויף די טשיפּס.אן אנדער איז דנאַ בעקן שפּאָן.די קלאָונד גענעס אָדער פּקר פּראָדוקטן זענען אָרדערלי געדרוקט אויף די רוק.די מייַלע פון ​​דנאַ שפּאָן טעכנאָלאָגיע איז די סיימאַלטייניאַס דיטעקשאַן פון אַ ריזיק קוואַנטיטי פון דנאַ סיקוואַנסיז.די לעצטע ווערסיע פון ​​​​פּאַטאַדזשאַן דיטעקשאַן שפּאָן קענען ידענטיפיצירן איבער 1700 מענטשלעך ווירוסעס אין אַמאָל.דנאַ שפּאָן טעכנאָלאָגיע סאַלווד די פראבלעמען פון טראדיציאנעלן נוקלעיק זויער כייברידיזיישאַן מעטהאָדס און האט זייער ברייט אַפּלאַקיישאַנז אין וויראַל דיאַגנאָסיס און עפּידעמיאָלאָגיקאַל לערנען.